Стерильная инокуляция зерна: LC и агар

Инокуляция зернового субстрата — один из ключевых этапов в выращивании грибов. От соблюдения стерильности на этом этапе напрямую зависит, будет ли у вас чистый мицелий или субстрат заразится плесенью и бактериями.

Подготовка

Перед началом работы тщательно вымойте руки с мылом, обработайте их антисептиком.
Протрите все поверхности рабочей зоны 70% спиртом или 10% раствором отбеливателя.
Убедитесь, что зерновой субстрат полностью простерилизован (автоклавирован) и остыл до комнатной температуры.
Подготовьте инокулянт: шприц с жидкой культурой (LC) или чашку Петри с проросшим агаром.

Инокуляция жидкой культурой (LC)

Наденьте маску и, по возможности, работайте в ламинарном боксе или рядом с горелкой (спиртовкой / бунзеновской горелкой).
Прожгите иглу шприца докрасна в пламени горелки и дайте ей остыть несколько секунд (или протрите стерильной спиртовой салфеткой, если игла сменная и стерильная).
Откройте банку с зерном (или фильтр-пакет), стараясь не касаться краёв. Держите крышку в руке, не кладите её на стол.
Впрысните 2–5 мл жидкой культуры через порт инокуляции (если есть) или приоткрыв крышку и введя иглу внутрь. Быстро закройте крышку.
Встряхните банку, чтобы LC равномерно распределилась по зерну.

Инокуляция агаром (с чашки Петри)

Работайте в максимально чистом месте — идеален ламинарный бокс. Если его нет, используйте «грязный бокс» (большую пластиковую коробку с обработанными спиртом стенками и отверстиями для рук).
Прожгите скальпель или иглу в пламени горелки, дайте остыть.
Откройте чашку Петри с мицелием. Вырежьте небольшой участок агара (1×1 см) с наиболее активным мицелием.
Откройте банку с зерном, быстро поместите кусочек агара внутрь на поверхность зерна и сразу закройте крышку.
Слегка встряхните банку, чтобы кусочек агара оказался внутри зерновой массы, а не на стенке.

После инокуляции

Подпишите банку: штамм, дата инокуляции, тип инокулянта (LC или агар).
Поместите банки в тёплое и тёмное место (обычно 22–26°C, в зависимости от культуры).
Первые 3–5 дней ежедневно встряхивайте банку, чтобы разбить слипшиеся зёрна — это ускорит обрастание.
Наблюдайте: через 5–10 дней мицелий должен начать активно распространяться по зерну. Если появились зелёные, чёрные или розовые пятна — субстрат контаминирован, его нужно утилизировать.

Важно: Не открывайте банки после инокуляции без крайней необходимости. Любое открытие — риск заражения. Если нужно проверить состояние, смотрите через прозрачные стенки или используйте смотровое окно.